蛋白質(zhì)樣品用哪種液相色譜柱分離效果最好？
蛋白質(zhì)樣品的分離效果取決于色譜柱的選擇，以下是幾種常見的色譜柱類型及其適用場(chǎng)景，幫助您選擇最適合的色譜柱：
1.?尺寸排阻色譜柱（SEC）
尺寸排阻色譜(SEC)是基于蛋白質(zhì)分子大小進(jìn)行分離的方法，適用于分析蛋白質(zhì)的聚合狀態(tài)和分子量分布。對(duì)于蛋白質(zhì)樣品，推薦使用孔徑為300 ?或更大的SEC色譜柱，例如：
恒譜生 Bio-SEC 色譜柱：適用于多種生物大分子，提供120 ?、300 ?等不同孔徑規(guī)格。
安捷倫 AdvanceBio SEC色譜柱：適用于超大分子(如抗體藥物、蛋白質(zhì)復(fù)合物)的快速分析，提供450 ?孔徑。
2.?反相色譜柱（RP-HPLC）
反相色譜柱基于蛋白質(zhì)的疏水性差異進(jìn)行分離，適用于分析蛋白質(zhì)的親疏水性變異。對(duì)于蛋白質(zhì)樣品，推薦使用C4或C8色譜柱，因?yàn)樗鼈儽菴18更適合完整蛋白質(zhì)的分離。例如：
安捷倫 AdvanceBio RP-mAb C4色譜柱：適用于完整單克隆抗體的快速分離。
恒譜生 C8-Bio色譜柱：適用于蛋白質(zhì)、多肽等生物大分子的分離。
3.?離子交換色譜柱（IEC）
離子交換色譜基于蛋白質(zhì)的電荷差異進(jìn)行分離，適用于分析蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)和電荷異質(zhì)性。根據(jù)蛋白質(zhì)的帶電性質(zhì)，可以選擇陽離子或陰離子交換柱。
4.?親和色譜柱（AC）
親和色譜利用特定配體與目標(biāo)蛋白質(zhì)的特異性結(jié)合進(jìn)行分離，具有高選擇性和高特異性。
5.?疏水相互作用色譜柱（HIC）
疏水相互作用色譜(HIC)適用于分析蛋白質(zhì)的天然構(gòu)象，尤其適合分離抗體藥物偶聯(lián)物(ADC)。
選擇建議
分子量較大：優(yōu)先選擇孔徑較大的SEC色譜柱(如300 ?、500 ?)。
需要高分辨率：選擇反相色譜柱(如C4、C8)。
樣品電荷差異大：選擇離子交換色譜柱。
目標(biāo)蛋白質(zhì)具有特異性配體：選擇親和色譜柱。
如果您的樣品具有特定需求(如疏水性、電荷性質(zhì)等)，可以進(jìn)一步咨詢專業(yè)技術(shù)人員以優(yōu)化色譜柱選擇。
發(fā)布于: 2025-03-11